2021-09
一、概述
? ? ? ?原料藥或者藥物制劑有關物質的檢測方法包括化學法、光譜法、色譜法等。目前有關物質檢測方法主要采用高效液相色譜法，在實際情況中我們經常會遇到同一個藥物制劑在不同的質量標準中，采用不同的液相方法進行有關物質的檢測，而最終會選擇哪種方法作為產品中有關物質的檢測方法，一般從以下幾個方面進行評價：①對樣品中雜質的檢出能力，包括雜質的檢出個數(shù)和檢出量；（同步考察樣品的制備方法是否可行）②對已知雜質的檢出能力和分離能力；③檢測波長的選擇；④方法學驗證結果是否符合可接受標準。
二、案例分析
2.1方法介紹
? ? ? 枸櫞酸西地那非片質量標準收載于USP43和原研廠家標準WS1-(X-010)-2010Z，在這兩個質量標準中均采用HPLC法等度洗脫方法且有關物質檢驗方法一致。另枸櫞酸西地那非原料藥EP10.0采用的是HPLC法梯度洗脫方法。
? ? ? 2021年04月06日國家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布了枸櫞酸西地那非片的國家藥品標準修訂件，其中有關物質的分析方法與EP10.0原料藥有關物質梯度洗脫方法一致，并于2021年10月06日起執(zhí)行。枸櫞酸西地那非片有關物質檢測方法正式由WS1-(X-010)-2010Z的等度洗脫方法升級為WS1-(X-010)-2010Z-2021梯度洗脫方法。
2.2 USP43與EP10.0有關物質檢測方法雜質檢出能力對比
? ? ? 兩種方法對同一批樣品檢測結果如下：
? ? ??結果表明，USP43和EP10.0兩種檢測方法檢測制劑的有關物質，樣品的制備方法均可行。系統(tǒng)適用性（分離度和靈敏度）均能符合要求，且檢出雜質個數(shù)和雜質量相當。
2.3 USP43與EP10.0有關物質檢測方法特定雜質分離度考察
? ? ? 采用EP10.0的雜質A、雜質B、雜質C、雜質D、雜質F、雜質G和枸櫞酸西地那非對照品，配制成單獨的定位溶液和混合對照品溶液，在兩種不同的色譜條件下進樣，比較兩種方法對已知雜質的雜質分離能力。
? ? ? 使用USP43色譜條件進行測定（DAD檢測器），色譜柱使用Agilent SBC18(5μm，4.6*250nm)，各雜質定位溶液和混合對照品溶液圖譜如下圖。
? ? ? ?使用EP10.0色譜條件進行測定（DAD檢測器），色譜柱使用Agilent SBC18(5μm，4.6*250nm)，各雜質定位溶液和混合對照品溶液圖譜如下圖。
? ? ? USP43枸櫞酸西地那非片有關物質方法，雜質F與西地那非峰的出峰時間相同，雜質G洗脫不出來。EP10.0枸櫞酸西地那非有關物質方法，雜質A、雜質B、雜質C、雜質D、雜質F、雜質G和西地那非均可檢出，且各成分峰間均能達到基線分離。EP有關物質的梯度洗脫方法對已知雜質的檢出能力和分離能力優(yōu)于USP等度洗脫方法。
2.4 USP43與EP10.0有關物質檢測波長考察
? ? ? 對USP方法（檢測波長290nm）和EP方法（檢測波長230nm）進行比較，將各雜質A、雜質B、雜質C、雜質D、雜質F、雜質G和西地那非峰，提取UV光譜，各色譜峰UV光譜如下圖。
? ? ? UV光譜圖顯示各雜質在230nm和290nm的響應趨勢保持一致。雜質A、雜質B、雜質F和西地那非的響應相當，雜質D和雜質C比西地那非響應偏高，雜質G比西地那非響應偏低。但各成分在230nm處的響應均高于290nm處的響應，即各雜質在230nm處均有較大吸收。綜上所述可優(yōu)選230nm波長作為有關物質的檢測波長。
2.5分析方法驗證
? ? ? 最后，對EP方法進行方法學驗證，驗證內容包括系統(tǒng)適用性、專屬性（選擇性及干擾、強制降解實驗）、檢測限和定量限、線性和范圍、精密度（重復性和重現(xiàn)性）、準確度、溶液穩(wěn)定性和耐用性。其中強制降解試驗，各破壞樣品所得色譜圖中，西地那非峰與相鄰的降解產物峰分離度≥1.5；各破壞樣品所得色譜圖中，西地那非色譜峰的純度≥995；各破壞樣品物料平衡應在95%~105%之間。各項的驗證結果均符合可接受標準。至此，確定EP方法作為枸櫞酸西地那非片有關物質的檢測方法。
三、總結
? ? ? USP43枸櫞酸西地那非片有關物質方法，雜質F與西地那非峰的出峰時間相同，雜質G洗脫不出來。雖然從正常樣品檢測結果無明顯差別，但對于后續(xù)穩(wěn)定性樣品檢測，使用USP43枸櫞酸西地那非片有關物質方法檢測樣品可能會導致雜質F和雜質G還有其它強保留降解雜質漏檢的可能。因此選擇EP10.0有關物質方法作為枸櫞酸西地那非片有關物質分析方法，最新頒布的國家藥品標準WS1-(X-010)-2010Z-2021同樣選擇了EP10.0方法進行有關物質的控制。
